黃曲霉毒素免疫親和柱
嵐致黃曲霉毒素免疫親和柱簡(jiǎn)介AFT免疫親和柱適用于基質(zhì)復雜、低的樣品中黃曲霉毒素B1，B2，G1，G2檢測的凈化?？梢赃M(jìn)行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA的定量分析，適用于谷物，食品，飼料等的樣品凈化過(guò)程。柱容量 約200ng 黃曲霉毒素儲存條件 2-8℃冷藏保存，不可冷凍嵐致黃曲霉毒素免疫親和柱1 用途用于實(shí)驗室凈化樣品提取物以進(jìn)行進(jìn)一步分析2 概要黃曲霉毒素是谷類(lèi)及其他農作物常見(jiàn)的霉變菌，是由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一類(lèi)低分子化合物。污染糧食、油料作物的種子，其中以花生、玉米易被污染，另外在小麥、高粱、巴西堅果、豆類(lèi)和大米等重要糧食中也經(jīng)常被檢出。黃曲霉毒素熱穩定性很高，一旦產(chǎn)生便難以除去。對動(dòng)物、植物和微生物具有很強的毒性，致癌力強，還能引起突變和導致畸形。黃曲霉毒素作為肝癌的三大誘因之一，也是胃癌，腸癌等疾病的主要原因，對人類(lèi)的健康構成很大威脅。世界各國對食品，飼料中的黃曲霉毒素都有嚴格的。3 原理測定的基礎是抗原抗體反應，免疫親和柱中含有和黃曲霉毒素抗體結合在一起的凝膠，樣品中的黃曲霉毒素經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)缓缶徛耐ㄟ^(guò)黃曲霉免疫親和層析柱，在免疫親和柱內黃曲霉毒素與抗體結合，其他的無(wú)關(guān)物質(zhì)不會(huì )結合而直接通過(guò)免疫親和柱，之后洗滌免疫親和柱除去沒(méi)有被結合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)。后加入甲醇將黃曲霉毒素釋放，然后注入到分析儀器中進(jìn)行進(jìn)一步的檢測。4 提供的試劑l 25支/盒免疫親和柱，規格：1ml/3ml5 操作者應注意事項l 黃曲霉毒素對人體有害，應戴手套操作。l 使用過(guò)的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液宜用5%濃度的次氯酸鈉溶液浸泡過(guò)夜。l 不要使用過(guò)了有效日期的免疫親和柱。l 親和柱于2-8℃冷藏保存，不可冷凍l 使用前，免疫親和層析柱需回至室溫（22~25℃）6 操作流程（符合GB/T 18979-2003國標方法）l 粉碎好的樣品過(guò)20目篩并在取樣前混合，不立即分析的樣品應放在冰箱中儲存。l 稱(chēng)取20g粉碎樣品及4g氯化鈉，加入100ml 70%甲醇/水。l 高速均質(zhì)約2分鐘，或震蕩器震蕩約30分鐘，l 過(guò)濾樣品至少10ml。l 取10ml濾液加入20ml水，混合。l 用玻璃纖維濾紙過(guò)濾至澄清，取15ml準備加入到免疫親和柱中過(guò)柱。l 將10ml注射器連接于免疫親和柱上端。l 處理好的樣品液15ml以1-2滴/秒的速度通過(guò)免疫親和柱，棄掉流出的液體。l 加10ml水淋洗柱子兩次，棄掉流出的液體，l 利用真空設備壓入空氣或用注射器吹干柱子中的水。l 加入1ml甲醇緩慢洗脫，流速約為2-3秒每滴。l 收集全部洗脫液于干凈的比色皿或其他容器中用于檢測。7 操作流程圖8 液相色譜測定條件● 激發(fā)/發(fā)射波長(cháng)：360nm/440nm● 流動(dòng)相：甲醇-水（45+55）● 流速：0.8mL/min● 進(jìn)樣量：20ul● 柱溫：30°C● 反應時(shí)間：10min用進(jìn)樣器吸取20µL黃曲霉毒素標準工作液注入HPLC色譜儀，在上述色譜條件下測定標準溶液的響應值（峰高或峰面積），得到黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標準溶液HPLC色譜圖
